制备染色标本应注意哪些事项（制备染色标本应注意哪些事项和要求）

制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节

1、如果是美蓝染色应注意菌龄，12-18小时的培养物。革兰氏应该注意乙醇的脱色时间，20-30秒，时间过长或过短都会和结果不符。芽孢染色注意菌龄2DAY 。

2、细菌夹馍染色注意事项： 加盖玻片时不可有气泡，否则会影响观察。 应用干墨水法时，涂片要放在火焰较高处并用文火干燥，不可使玻片发热。 在采用Tyler法染色时，标本经染色后不可用水洗，必须用20%CuSO4冲洗。

3、染料作用标本的时间平均约1—3分钟，而所有的染色时间内，整个涂片（或有标本的部分）应该浸在染料之中。 若作复合染色，在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性化合物，可增加染料和细菌的亲和力。一般固定后媒染，但也可以结合固定或染色同时进行。 脱色 用醇类或酸类处理染色的细胞，使之脱色。

4、注意事项：固定时不宜太烫，以免因为高温导致玻片上的标本性质发生改变带来错误的结果。涂片的含义 涂片是检测血液中或者组织中的包括淋球菌、新型隐球菌、梅毒螺旋体、白喉棒状杆菌等病原体的一种检查方法。正常值 涂片检查中未检出绝对致病菌，条件致病菌数量及所在部位应该正常。

5、染色后的微生物标本是死的，在染色过程中微生物的形态与结构均会发生一些变化，不能完全代表其生活细胞的真实情况，染色观察时必须注意。

进行革兰染色时应注意哪些事项

1、革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成*性菌；如脱色时间过短，革兰氏*性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。染色过程中勿使染色液干涸。

2、在进行革兰氏染色实验时，应选择活跃性较强的菌种，涂片不宜过厚，脱色要完全，不可不够或者过度。这些注意事项有助于保证染色的质量。

3、本实验应注意：选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染色成红色而造成假*性。涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。脱色是革兰氏染色成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假*性。

4、涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以不烫手为度，以免菌体受损，致使染色反应不准。 革兰染色操作的关键步骤是对脱色的掌握，脱色时间不足，革兰氏*性菌可染成阳性菌；脱色过度，革兰阳性菌会染成*性菌。故应注意掌握，以无紫色脱出时立即水洗。

5、选择活跃性较强的菌种、涂片不宜过厚等。革兰染色是对细菌进行分类的一种常用染色方法，为保证染色的质量，其注意事项为在进行革兰染色实验时，应选择活跃性较强的菌种，涂片不宜过厚，脱色要完全，不可不够或者过度等。

瑞士染色的方法和步骤?有哪些注意事项?适用于哪些标本的染色

瑞氏染色的步骤：（1）铅笔作标记，将血涂片平放在染色架上，蜡笔划线可防液体外溢。（2）血涂片自然干燥后，滴瑞氏染液（A液）数滴覆盖血片，染约1min。（3）滴加稍多体积的缓冲液，用吸耳球将其与染液吹匀，染约5分钟。

操作步骤：滴加瑞氏吉姆萨A液（约0.5ml-0.8ml）涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min； 再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。

染色用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染液滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染1分钟。加等量蒸馏水（或缓冲液）与染液混合再染5分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉，用吸水纸吸干，自然干燥后即可观察。

瑞氏染色法：为了观察细胞内部结构，识别各种细胞及异常变化，血涂片必须进行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变而来。目前常用瑞氏染色法。【目的】掌握血涂片的染色方法。【原理】把已制成的血细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色。其着色的原理包括物理 吸附及化学亲和作用。

第一步：解释瑞氏染色操作前的准备（也就是物品的准备过程）。第二步：解释瑞氏染色具体的操作步骤（要求回答时的逻辑要明确，同样注意染色的具体的顺序不能错）。第三步：解释瑞氏染色操作的注意事项。

．瑞氏染料是由碱性染料美蓝（ Methvlem blue ）和酸性染料**伊红（ Eostm Y ）合称伊红美蓝 染料即瑞氏 （美蓝－伊红Y）染料。伊红钠盐的有色部分为*离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。

制备细菌染色标本时应注意什么

接种环需以无菌操作，载玻片要洁净无油迹，滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要涂抹均匀，不宜过厚；2，干燥是室温干燥；3，热固定温度不宜过高，以玻片背面不烫手为宜，否则会改变甚至破坏细胞形态；4，染色时滴加染液覆盖上菌体薄膜即可；5，染色过程中，不可使染液干涸。

细菌夹馍染色注意事项： 加盖玻片时不可有气泡，否则会影响观察。 应用干墨水法时，涂片要放在火焰较高处并用文火干燥，不可使玻片发热。 在采用Tyler法染色时，标本经染色后不可用水洗，必须用20%CuSO4冲洗。

干燥：涂片最好在室温下自然干燥，或将标本面向上，置于酒精灯火焰高处慢慢烘干，切不可在火焰上烧干。 固定：细菌的固定常用火焰加热法，即将上述已干的涂片在酒精灯火焰中通过3次。

如果是美蓝染色应注意菌龄，12-18小时的培养物。革兰氏应该注意乙醇的脱色时间，20-30秒，时间过长或过短都会和结果不符。芽孢染色注意菌龄2DAY 。